凍干粉針劑是先將無(wú)菌藥品溶液迅速降溫，再真空加熱，通過(guò)升華的方式除去水分，制備成凍結(jié)狀態(tài)良好的無(wú)菌粉注射劑。由于冷凍干燥在低溫下進(jìn)行，對(duì)于許多熱敏性的物質(zhì)特別適用。蛋白質(zhì)、微生物類(lèi)通過(guò)凍干過(guò)程不會(huì)失去生物活力或發(fā)生變性，因此凍干粉針劑在醫(yī)藥行業(yè)得到廣泛地應(yīng)用。由玻璃西林瓶、膠塞、鋁塑蓋組成的包裝密閉系統(tǒng)是凍干粉針劑常見(jiàn)的包裝形式。
凍干粉針劑包裝密閉系統(tǒng)的完整性可以防止內(nèi)容物損失、微生物侵入以及氣體（氧氣、空氣、水蒸氣等）或其他物質(zhì)進(jìn)入，保證藥品持續(xù)符合安全與質(zhì)量要求的能力。美國(guó)藥典USP1207.2中介紹了6種確定性的包裝密封性檢查方法，其中真空衰減法和壓力衰減法都是定量測(cè)試方法，文獻(xiàn)報(bào)道檢出限級(jí)別均在3級(jí)（泄漏孔徑＞1.0~5.0 μm）。目前，真空衰減法較多使用于西林瓶組成的包裝系統(tǒng)的微泄漏測(cè)試，泄漏部位必須有氣體或液體存留，泄漏部位存在液體時(shí)測(cè)試壓力需低于蒸氣壓，不適用含顆粒物的懸濁液或乳狀液及微頂空高粘度的液體。如果內(nèi)容物是粉末，會(huì)產(chǎn)生堵塞泄漏通道的風(fēng)險(xiǎn)。
由于凍干粉針劑的加工工藝，某些成品頂空接近極限真空，內(nèi)容物為餅狀固體。如果包裝系統(tǒng)發(fā)生泄漏，瓶?jī)?nèi)真空度會(huì)發(fā)生改變，選用真空衰減測(cè)試此類(lèi)產(chǎn)品，可能會(huì)因沒(méi)有建立有效壓差，出現(xiàn)假陰性的測(cè)試結(jié)果。本次測(cè)試采用壓力衰減法，設(shè)置有效的測(cè)試參數(shù)，通過(guò)模擬泄漏建立線(xiàn)性關(guān)系，測(cè)試陰性實(shí)體和激光打孔陽(yáng)性樣品進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證。結(jié)果表明，該法靈敏度高，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，可有效檢測(cè)凍干粉針劑的密封性。
一、材料與方法
1.1 儀器與材料
AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測(cè)試儀，廣州標(biāo)際包裝設(shè)備有限公司；10 mL西林瓶鋼制實(shí)心陰性實(shí)體，廣州標(biāo)際包裝設(shè)備有限公司；10 mL陽(yáng)性樣品（激光打孔，有證校準(zhǔn)孔徑為1.959 μm、3.394 μm、4.689 μm），zillion提供；FCO 220氣體流量計(jì)，F(xiàn)urness Controls Limited；凍干粉針劑（頂空真空度在1Pa以下），規(guī)格為10mL，某客戶(hù)送樣。
1.2 研究方法
被測(cè)樣品放入特制腔體，鎖緊腔蓋，儀器對(duì)測(cè)試腔充入預(yù)定氣壓，系統(tǒng)平衡后，在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)監(jiān)測(cè)到測(cè)試腔內(nèi)的壓力下降，如果壓力下降值超過(guò)設(shè)定的閾值，則表明樣品泄漏。反之，則判定無(wú)泄漏。本次使用的檢測(cè)設(shè)備為AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測(cè)試儀，見(jiàn)圖1。針對(duì)待測(cè)樣品，參數(shù)設(shè)定如下：目標(biāo)壓力：200000 Pa。循環(huán)1的平衡時(shí)間5s，測(cè)試時(shí)間5s；循環(huán)2的平衡時(shí)間：10s，測(cè)試時(shí)間15s。
圖1 AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測(cè)試儀
二、線(xiàn)性及范圍
氣體流量計(jì)與腔體有連接，打開(kāi)連接通道時(shí)，可以向系統(tǒng)釋放一定體積的微小氣流，可為模擬泄漏，見(jiàn)圖2。把10mL的陰性實(shí)體放入腔體，蓋好上腔蓋，打開(kāi)氣體流量計(jì)，調(diào)整5個(gè)不同氣體流量，分別測(cè)得不同流量下的壓力衰減值。以引入泄漏量為X軸，對(duì)應(yīng)的測(cè)的差壓值為Y軸作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。線(xiàn)性回歸方程為：y = 840.55x + 104.15，R=0.9999，接收準(zhǔn)則為R＞0.999，表明0.039 mL/min~1.485mL/min范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。
圖2 氣體流量計(jì)
三、陰性樣品與陽(yáng)性樣品驗(yàn)證
判定包裝系統(tǒng)是否有泄漏的重要參照物是陰性對(duì)照，設(shè)計(jì)采用316不銹鋼材質(zhì)制作與被測(cè)樣品外形、體積尺寸相同的實(shí)心體，作為陰性對(duì)照樣品。把陰性樣品放到測(cè)試腔進(jìn)行測(cè)試，連續(xù)測(cè)試10次，均值為104 Pa，RSD=0.89%。陰性樣品的重復(fù)性良好 ，測(cè)試結(jié)果為無(wú)泄漏。陰性樣品見(jiàn)圖3。
圖3 陰性對(duì)照樣品
陽(yáng)性樣品的制備采用激光打孔制備技術(shù)，其漏孔幾何形狀和內(nèi)部氣體流動(dòng)行為接近真實(shí)缺陷，打孔位置在瓶身。把陽(yáng)性樣品放入測(cè)試腔進(jìn)行測(cè)試，通過(guò)陽(yáng)性樣品的標(biāo)示孔徑與儀器測(cè)試推算出來(lái)的孔徑做對(duì)比，來(lái)驗(yàn)證儀器的準(zhǔn)確度。陽(yáng)性樣品見(jiàn)圖4，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。
圖4 激光打孔陽(yáng)性對(duì)照品
表1 陽(yáng)性瓶驗(yàn)證測(cè)試系統(tǒng)準(zhǔn)確性結(jié)果
由表1可知，標(biāo)示孔徑為1.959 μm、3.394 μm、4.689 μm的陽(yáng)性樣品均能100%識(shí)別，偏差在0.5μm以?xún)?nèi)，方法準(zhǔn)確度良好。
四、樣品測(cè)試
方法建立以及驗(yàn)證通過(guò)后，把3個(gè)待測(cè)樣品分別放入測(cè)試腔內(nèi)，旋緊上腔蓋，進(jìn)行測(cè)試，測(cè)出樣品的參考?jí)毫χ岛蛪毫λp值?？讖綖?μm的激光打孔樣品的壓力衰減值為170Pa＞104Pa，與無(wú)泄漏的陰性實(shí)體有良好的區(qū)分度。選擇2.0μm標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)作為閾值，樣品測(cè)試結(jié)果為合格。測(cè)試樣品見(jiàn)圖5，測(cè)試結(jié)果表2。
五、討論與分析
（1）針對(duì)此次測(cè)試的10mL凍干粉針劑，壓力衰減法在AUTO GBM-L2 雙壓法微泄漏密封測(cè)試儀中的檢出限在2 μm，達(dá)到《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南》中文獻(xiàn)報(bào)道檢出限＞1.0~5.0 μm級(jí)別，優(yōu)于微生物挑戰(zhàn)法，滿(mǎn)足包裝系統(tǒng)密封性的檢測(cè)需求。
（2）以上方法建立是基于測(cè)試樣品進(jìn)行的開(kāi)發(fā)及驗(yàn)證，不具有通用性。針對(duì)不同的測(cè)試樣品，需根據(jù)樣品實(shí)際尺寸設(shè)計(jì)緊密貼合的腔體與陰性對(duì)照樣品，再進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)及驗(yàn)證。重點(diǎn)需要驗(yàn)證方法的測(cè)試靈敏度。
（3）陽(yáng)性樣品屬易耗品，研究表明，1 μm的激光打孔極容易被環(huán)境的灰塵雜質(zhì)堵塞。多次重復(fù)性使用會(huì)導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確。YY/T0681.18中表明需使用氣體流量計(jì)連接測(cè)試腔體，用于引入不同速率的人為泄漏，驗(yàn)證泄漏測(cè)試的靈敏度。
（4）藥物制劑產(chǎn)品眾多，真空衰減法作為無(wú)損、快速、定量的檢測(cè)方法，廣泛應(yīng)用于凍干粉針劑、BFS、預(yù)充針等樣品的微泄漏檢測(cè)。此法有一定的局限性，不適用含顆粒物的懸濁液或乳狀液及微頂空高粘度的液體。如果內(nèi)容物是粉末，會(huì)產(chǎn)生堵塞泄漏通道的風(fēng)險(xiǎn)。
（5）壓力衰減法和和真空衰減法的核心測(cè)試條件之一是需要在樣品內(nèi)外建立有效的壓差。凍干粉針劑頂空常為負(fù)壓或者氮?dú)?，在測(cè)試方法選擇上需注意能否建立有效壓差，以確保測(cè)試的有效性。高效定量檢測(cè)包裝系統(tǒng)密封性建議選用真空衰減/壓力衰減測(cè)試方法結(jié)合的測(cè)試儀器，可以打破單一測(cè)試方法的局限性，適應(yīng)范圍更廣，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確有效。
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Products陳馬蓬
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